ELISA的操縱因固相載體的形成不同而有所差異，海內醫學檢修一般均用板式點。除特殊情況外，在醫學檢修中均以血清作為檢測標本。加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。每次加標本應更換吸嘴，以發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑，良好的儀器和準確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。有些標本可直接進行測定(如血清 、尿液)，有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。
ELISA的基本原理有三條：
1. 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；
2. 抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
3. 酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查。
本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大，可概括四個方面：
·免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
·研究抗酶抗體的合成。
·顯現微量的免疫沉淀反應。
·定量檢測體液中抗原或抗體成份。
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