IgG的Protein A親合膜色譜法分析

Protein A親合膜色譜法
膜色譜采用具有一定孔徑的膜作為介質(zhì)，連接配基，利用膜配基與蛋白質(zhì)等目標(biāo)作用進(jìn)行分離純化，當(dāng)料液以一定流速流過膜的時(shí)候，目標(biāo)分子與膜介質(zhì)表面或膜孔內(nèi)基團(tuán)特異性結(jié)合，而雜質(zhì)則透過膜孔流出，待處理結(jié)束后再通過洗脫液將目標(biāo)分子洗脫下來．Protein A能與人IgG分子的Fc段結(jié)合，但只結(jié)合其中的IgGl，IgG2和IgG4亞類，不能結(jié)合IgG3亞類[1“15]．用木纖維與甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯（GMA）共聚接枝形成含有活性環(huán)氧基團(tuán)的復(fù)合介質(zhì)，經(jīng)過
處理后，制成膜裝入①16 mm×6 mm的柱中，共裝膜片20層，然后用0．15 mol／L NaCI的0．02mol／L pH7．4的磷酸鹽緩沖液平衡柱子備用．將
2 mL血漿用0．15 mol／I。NaCl的0．02 mol／LpH7．4的磷酸鹽緩沖液稀釋一倍，以2 mL／min的速度循環(huán)上樣5 min，用0．2 mol／L pH2．3的甘
氨酸--HCI緩沖液洗脫．洗脫峰的峰形較好，拖尾不嚴(yán)重．用毛細(xì)管電泳對(duì)純化的IgG進(jìn)行分析，純度達(dá)到98％以上
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