熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號的變化實(shí)時(shí)檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對起始模板進(jìn)行定量分析。康為世紀(jì)提供利用熒光定量PCR的方法對樣品中的基因表達(dá)情況進(jìn)行相對定量或定量分析的技術(shù)服務(wù)。
服務(wù)價(jià)格
相對定量SYBR GreenI 染料法 | ￥200/樣品•基因 | 4周 |
服務(wù)內(nèi)容
相對定量 （mRNA表達(dá)量分析）
基因表達(dá)的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后求出對于內(nèi)參基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進(jìn)行比較，可以對不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。內(nèi)參基因通常選用表達(dá)量相對恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時(shí)對內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)檢測，可以對樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。
定量
定量首先必須構(gòu)建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標(biāo)準(zhǔn)品，本公司服務(wù)內(nèi)容為采用TA克隆的方法構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品。使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作5個(gè)點(diǎn)以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，可以使用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知濃度的檢測樣品進(jìn)行量 （起始拷貝數(shù)）分析。
SYBR Green I 染料法
SYBR Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，SYBR Green I只與雙鏈DNA結(jié)合才能發(fā)出熒光，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，熒光信號與雙鏈DNA分子數(shù)成正比，隨著擴(kuò)增產(chǎn)物增加而增加，熒光信號的強(qiáng)度代表了反應(yīng)體系中雙鏈DNA分子的數(shù)量。以SYBR Green I作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為染料法。
TaqMan探針法
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累，因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。以Taqman探針作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為探針法。
服務(wù)優(yōu)勢
·先進(jìn)的儀器，的試劑，專業(yè)的團(tuán)隊(duì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。
·免費(fèi)設(shè)計(jì)優(yōu)化引物，使定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率達(dá)到90%以上，使相對定量結(jié)果更可靠。
樣品要求
客戶需提供組織、細(xì)胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：
材料種類 | 樣品要求 | 起始量 | 保存及運(yùn)輸方式 |
血液 | 新鮮血液及抗凝劑處理的全血 | 1ml | 加入Trizol-80℃貯存，干冰運(yùn)輸 |
培養(yǎng)細(xì)胞 | 離心收集的細(xì)胞 | 1x107 | |
動物組織 | 一般材料 | 100mg | -80℃或者液氮貯存，干冰運(yùn)輸 |
植物 | 一般材料 | 100mg | |
| RNA | OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好 | >1ug | -80℃貯存，干冰運(yùn)輸 |
| DNA | OD260/OD280在1.7-1.9之間，完整性好 | >1ug | -20℃貯存，冰袋運(yùn)輸 |
| cDNA | 內(nèi)參基因檢測成功 | >20ul |
終產(chǎn)品
·一對引物（上游引物和下游引物）及其序列；
·完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告；
·
服務(wù)說明
·客戶提供基因序列。
·如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗，使實(shí)驗(yàn)提前終止，已啟動的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域的解決方案提供商，全力打造高品質(zhì)生物試劑產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈，致力于提供全方面的解決方案。目前建立了一系列技術(shù)服務(wù)平臺。我們致力于每位客戶的滿意和成功，為客戶提供zui有競爭力的產(chǎn)品和解決方案，持續(xù)為客戶創(chuàng)造zui大價(jià)值。
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